TECHNIQUES DE STERILISATION

A/ Stérilisation par la chaleur :


I / Chaleur sèche ( oxydation des protéines ):




◦chauffage direct :



- Effectuer trois ou quatre passages lents des objets à stériliser dans la flamme bleue du bec Bunsen afin de détruire à sa surface toute matière organique
- A utiliser pour les objets en verre ( pipettes, baguettes de verre...), pour certains objets en métal (anse , pince), ne convient pas pour le plastique, les objets tranchants, les instruments de chirurgie délicats ...






◦stérilisateurs à air chaud ( fours Pasteur, Poupinel, de type Jouan ) :



- Emballer le matériel dans du papier aluminium, les récipients et tubes à col doivent être bouchés avec du coton cardé
- Les spores et germes sont détruits en chaleur sèche, par un chauffage de : 4 heures à 140 °C ; 2 heures 30 à 160°C ; 30 min à 180°C
- A utiliser pour la verrerie, porcelaine et instruments métalliques ( indispensable pour les parties des objets qui ne peuvent pas être atteintes par la flamme )
- Ne convient pas pour les objets en matière plastique ou caoutchouc ou objets délicats.


II / Chaleur humide ( dénaturation des protéines ) :




◦autoclavage ( méthode de stérilisation la plus efficace )



- Dans une atmosphère de vapeur d'eau exempte d'air, toutes les bactéries y compris les spores sont tuées en 20 min à 121°C. Pour un volume donné, la température est fonction de la pression ; on obtient la température requise de 120°C, très supérieure à la température normale d'ébullition de l'eau, en chauffant en surpression, c'est à dire en vase clos. L'appareil utilisé est l'autoclave.
- La préparation du matériel se fait selon l'indication du fournisseur de l'autoclave, à savoir de façon générale que la verrerie sera bouchée au coton et recouvert de papier aluminium, les récipients contenant un milieu de culture seront remplis aux 3/4, les instruments métalliques sont déposés sur un plateau de boites spéciales contenant une solution de carbonate de soude à 2% contre la rouille ...
- Ne convient pas pour les produits liquides délicats ( milieux albumineux, lait, gélatine ... )
- A utiliser pour les milieux de culture, matériel en caoutchouc, la verrerie, les instruments de prélèvement et la stérilisation du matériel après son utilisation.






◦ébullition



- Un chauffage de 30 minutes à 100°C par ébullition ou un maintien dans la vapeur d'eau bouillante suffit à détruire toutes les formes végétatives. Dans ces conditions les spores ne sont pas détruites : on peut améliorer à ce moment là l'efficacité de l'ébullition en ajoutant à l'eau des solutions salines concentrées ( augmentation du point d'ébullition ) ou en prolongeant le chauffage.
- A utiliser pour la stérilisation des produits liquides délicats : milieux albumineux, lait, gélatine, solutions concentrées de glucides, ...


III / Pasteurisation et tyndallisation :







◦pasteurisation



- Conservation des produits naturels pendant un temps limité, ne détruit que les formes végétatives mais pas les spores.
- Le liquide est porté rapidement à 90°C pendant 30s, par exemple,puis on le refroidit brusquement à 10°C.
- Conservation des produits alimentaires






◦tyndallisation



- Chauffage à 70°-100°C à plusieurs reprises ( 1 heure tous les jours pendant 3 jours ) dans un bain marie thermostaté.
- Utilisation très limitée aux substances thermolabiles non filtrables (émulsion de jaune d'oeuf, vaccins), préparation de milieux à base de sérum ou de jaune d'oeuf.
B/ Stérilisation par filtration:
Plusieurs types de filtration existe :
- les bougies de type Chamberland : tubes à fond arrondi dont les parois sont poreuses, en porcelaine. la dimension de ces pores varie de quelques µm au 1/10 ème de µm.
- disques : disques en verre fritté de porosité de 150 à 1 µm.
- membranes : membranes plastiques minces comportant des millions de pores par cm2 dont la taille, très uniforme, varie de 8 à 0.01 µm et occupant environ 80% du volume du filtre.En bactériologie, on utilise surtout les filtres de 47 mm de diamètre dont les pores 0.45 µm de diamètre retiennent à peu près tous les microorganismes en dehors des virus.
Stériliser des liquides altérables par la chaleur : sérums, solutions hydrolysables, solutions glucidiques, vitamines ...
C/ Action des agents chimiques :
L'emploi d'agents chimiques vise la destruction d'espèces bactériennes déterminées au sein d'une flore poly-microbienne.


I / Antiseptiques

- Tuent les cellules vivantes, microorganismes et autres. Leur action est quasi instantannée. Ils agissent à l'intérieur de l'organisme ou à sa surface : teinture d'iode, mercryl laurylé, permanganate de potassium, eau oxygénée ...
- Utilisation locale chez les êtres vivants, au niveau des plaies et des muqueuses


II / Désinfectants

- Empêche les contaminations humaines et animales


- vapeurs ( formol, gaz sulfureux, oxyde d'éthylène )
- liquides ( phénols, sulfate de cuivre, de fer, eau de Javel, permangante de potassium )
- solide ( chaux vive )

- Utiliser pour tous les milieux extérieurs à l'Homme : eau, air, sol ( objets inanimés, désinfection du matériel plastique utilisé en microbiologie )


III / Antibiotiques

Substances d'origine naturelle ou obtenues par synthèse chimique.


On distingue :

- les antibiotiques bactériostatiques qui stoppent la multiplication des bactéries sans les détruire
- les antibiotiques bactéricides qui tuent les bactéries
Utilisation in vivo.
D/ Action des radiations :
- C'est la lumière U.V qui est le plus souvent utilisée ( lampes germicides ou stérilampes ) : stérilisation des surfaces et de l'air ambiant, dans des locaux ou des hottes, servant aux manipulations en atmosphère stérile ( hottes à flux laminaire ).
- Utilisation en virologie, cultures cellulaires, préparation et conditionnement des produits pharmaceutiques, ensemencements bactériens, préparation de milieux. L'irradiation précède et suit la manipulation.
- Les rayons X ou y sont utilisés pour la conservation de certains produits alimentaires.